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產(chǎn)品中心

PRODUCTS CENTER

當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心PCR試劑盒50T布魯氏菌檢測試劑盒

布魯氏菌檢測試劑盒
產(chǎn)品簡介

布魯氏菌病(Brucellosis)是由布魯氏菌(Brucella)引起的畜源性人畜共患傳染病,在牛、羊、豬中常發(fā)生,患病家畜是人類布魯氏菌病的主要傳染源。近年來全國各地布魯氏菌病疫情有上升的趨勢,給畜牧業(yè)發(fā)展及人類身體健康帶來極大的危害和威脅,造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失和嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。布魯氏菌檢測試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理,主要用于布魯氏菌的定性篩查檢測。

產(chǎn)品型號:50T
更新時(shí)間:2025-07-01
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
訪問量:2169
詳細(xì)介紹在線留言
 【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:布魯氏菌檢測試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)

英文名稱:Brucella Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】 25T/盒 & 50T/盒

【預(yù)期用途】

布魯氏菌病(Brucellosis)是由布魯氏菌(Brucella)引起的畜源性人畜共患傳染病,在牛、羊、豬中常發(fā)生,患病家畜是人類布魯氏菌病的主要傳染源。近年來全國各地布魯氏菌病疫情有上升的趨勢,給畜牧業(yè)發(fā)展及人類身體健康帶來極大的危害和威脅,造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失和嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。布魯氏菌檢測試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理,主要用于布魯氏菌的定性篩查檢測。

【檢驗(yàn)原理】

?針對布魯氏菌基因設(shè)計(jì)特異性引物和分子信標(biāo)探針,在待檢樣本中含有布魯氏菌DNA的情況下,PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應(yīng)熒光信號進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測和輸出,實(shí)現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。

【主要組成成份】

序號 組成 25T/ 50T/
1 布魯氏菌 PCR反應(yīng)液 437.5 μL×1 875 μL×1
2 布魯氏菌 混合酶液  62.5 μL×1 125 μL×1
3 布魯氏菌 陰性對照   40 μL×1 40 μL×1
4 布魯氏菌 陽性對照   40 μL×1 40 μL×1
5 說明書 1 1

注:陰性對照為不含布魯氏菌的其它菌的混合物,陽性對照為滅活的布魯氏菌。

【儲(chǔ)存條件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融,有效期12個(gè)月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

1. 如使用原始標(biāo)本進(jìn)行檢測。標(biāo)本(病人腦脊液、靜脈血、關(guān)節(jié)液;病畜靜脈血,乳汁;菌落,菌苔等)應(yīng)為新鮮采集并使用雙蒸滅菌水或滅菌生理鹽水懸浮的原始標(biāo)本。

2. 如需在增菌后進(jìn)行PCR檢測,則應(yīng)使用選擇性增菌液對原始標(biāo)本進(jìn)行增菌。

3. 標(biāo)本收集后若不能立即檢測,可置于2~8℃冷藏過夜保存;如需長期保存,標(biāo)本應(yīng)凍存于-20℃~-80℃。

【檢驗(yàn)方法】

1. 試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))

(1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑,充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著液體。

(2)核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數(shù)(1T)+陽性對照數(shù)(1T)+誤差預(yù)留量(1T)+樣本數(shù)

單反液配制表(每份) PCR反應(yīng)液 17.5 μL
混合酶液(Taq酶+UNG酶) 2.5 μL

(3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

(4) 蓋緊PCR反應(yīng)管蓋后將PCR反應(yīng)管轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存。

2.樣本準(zhǔn)備(樣本處理區(qū))

用QIAGEN、Roche公司提取試劑盒提取DNA,具體操作按照其試劑盒說明書操。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測標(biāo)本DNA各5 μl、終體積25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,終體積為25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

4.PCR(PCR擴(kuò)增區(qū))

(1)取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。

(2)按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

反應(yīng)體積 25 μL 通道選擇 FAM通道采集布魯氏菌熒光信號
PCR 步驟 條件 循環(huán)數(shù)
反應(yīng) UNG處理 50℃:2分鐘(min 1
條件 預(yù)變性 95℃:3分鐘(min 1
  預(yù)擴(kuò)增 95℃:5秒(s 5
  55℃:40秒(s
  PCR擴(kuò)增 95℃:5秒(s 40
  55℃:40秒(s
  (此階段結(jié)束時(shí)采集熒光信號)

注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時(shí)不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇None。

【參考值(參考范圍)】

1.試劑盒有效性判定:

(1)陽性對照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。

(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。

2.標(biāo)本結(jié)果判定:

(1)陽性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。

(2)可疑:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測,如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

(3)陰性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

通道及檢測結(jié)果 標(biāo)本檢測結(jié)果解釋
FAM
陰性(-) 標(biāo)本中未檢出布魯氏菌
陽性(+) 標(biāo)本中檢測出布魯氏菌

【檢驗(yàn)方法的局限性】

1. 當(dāng)檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的ZD檢出限可能會(huì)發(fā)生假陰性的結(jié)果。

2. 本試劑盒僅供標(biāo)本初步篩查使用,對于本試劑盒檢測陽性結(jié)果應(yīng)進(jìn)一步使用培養(yǎng)法進(jìn)行確診。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 產(chǎn)品的ZD檢出限為102CFU,產(chǎn)品CV值≤5%。

【注意事項(xiàng)】

1. 整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

2. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。

3. 為保證試劑不受標(biāo)本污染,必須將混合酶液及PCR反應(yīng)液保存于試劑準(zhǔn)備區(qū)。

4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。

5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。

6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。

7. 儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。

8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。

9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。


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